做液相色譜的時(shí)候第一步就是流動(dòng)相的配制，流動(dòng)相是否干凈對(duì)整個(gè)液相色譜系統(tǒng)的正常運(yùn)行至關(guān)重要。本文將教大家怎么配制流動(dòng)相。

A. 液相試劑要求

試劑如甲醇，乙腈必須為色譜級(jí)純，其他試劑也盡量使用色譜級(jí)純，試劑標(biāo)簽上都會(huì)標(biāo)有色譜級(jí)或HPLC等字樣。水為超純水或者直接購買質(zhì)量有保證的純凈水。
B. 流動(dòng)相配置注意事項(xiàng)
一般來說，溶劑的混合按體積比（V/V）或重量比（W/W）進(jìn)行。溶液的體積因溫度而變化，所以按重量比混合配置流動(dòng)相，樣品測(cè)定的重復(fù)性較好，但是操作繁瑣，通常多為體積混合。
體積混合有三種方式，例如50%乙腈水溶液：
方式（1）：可以用量筒量取乙腈500ml，再量取水500ml，兩種液體在瓶內(nèi)充分搖晃混合。
方式（2）：可以先取500ml乙腈到1L容量瓶中然后用水定容。
方式（3）：可以先取500ml水到1L容量瓶中然后用乙腈定容。
這三種方式配置得到的流動(dòng)相組成都是不同的，即使不考慮其他方面因素，保留時(shí)間也不會(huì)相同。一般情況推薦使用方式（1）來配置流動(dòng)相。
C. 含緩沖鹽流動(dòng)相的配制需注意的問題
配緩沖鹽使用的鹽試劑也盡量使用色譜級(jí)純，稱樣要jing準(zhǔn)，為了達(dá)到要求，選用合適量程的天平且每天使用前對(duì)天平校正。按要求配置好以后必須通過0.45μm或0.22μm濾膜過濾并超聲脫氣20min以上。
注意：緩沖鹽要臨用新配。
D. 何時(shí)調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH值
采用反相色譜法分離弱酸（3≤pKa≤7）或弱堿（7≤pKa≤8）樣品時(shí)，通過調(diào)節(jié)流動(dòng)相的pH值，以抑制樣品組分的解離，增加組分在固定相上的保留，并改善峰形的技術(shù)稱為反相離子抑制技術(shù)。
（1）對(duì)于弱酸，流動(dòng)相的pH值越小，組分的k值越大，當(dāng)pH值遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于弱酸的pKa值時(shí)，弱酸主要以分子形式存在；分析弱酸樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱酸，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和1%醋酸溶液。
（2）對(duì)于弱堿，情況相反。分析弱堿樣品時(shí)，通常在流動(dòng)相中加入少量弱堿，常用50mmol/L磷酸鹽緩沖液和30mmol/L三乙胺溶液。
流動(dòng)相中加入有機(jī)胺可以減弱堿性溶質(zhì)與殘余硅醇基的強(qiáng)相互作用，減輕或消除峰拖尾現(xiàn)象。所以在這種情況下有機(jī)胺（如三乙胺）又稱為減尾劑或除尾劑。
注意：PH的調(diào)節(jié)不可超出色譜柱的PH耐受范圍。